Новый метод определения антибиотиков в меде

Мед может быть полезным лишь в случае натуральности и абсолютной доброкачественности. В натуральном меде не должны содержаться вещества, не свойственные его природному составу: токсичные и радиоактивные элементы, остатки лекарственных препаратов.

Для стимулирования пчелиных семей, профилактики и борьбы с болезнями пчел широко используют антибиотики. Их остаточные количества, по имеющимся сведениям, переносятся пчелами в мед и длительное время в нем сохраняются.

Почему это вредно? Даже минимальные концентрации антибиотиков в продуктах пчеловодства при ежедневном их употреблении убивают в организме человека чувствительных к ним бактерий. Однако самые сильные выживают, что приводит к селекции и отбору резистентных к антибиотикам бактерий. Эти бактерии — большая проблема, так как становятся неуязвимыми перед лекарствами. Для борьбы с ними требуются новые, еще более сильные препараты. Бактерии выходят из-под контроля, и производство необходимых антибиотиков превращается во все более трудную задачу. Вот лишь некоторые примеры коварного воздействия антибиотиков: левомицетин тормозит кроветворение, что крайне опасно для жизни человека, когда его организм и так подвержен инфекции; тетрациклины повреждают кости и зубы.

Продолжительность сохранения антибиотика в меде зависит от его природы, происхождения, характера взаимодействия с компонентами продукта, в частности с моно- и дисахаридами. Отдельные антибиотики сохраняются в товарном меде более трех лет. Такой продукт может вызвать аллергические реакции, нарушить баланс кишечной микрофлоры. Возникают устойчивые формы микроорганизмов, и дальнейшее применение антибиотиков с лечебной целью становится неэффективным.

На рынках нашей страны мед реализуют практически без исследования на наличие антибиотиков. Отсутствие необходимого контроля нередко способствует необоснованному использованию различных антибиотиков в пчеловодстве и значительному превышению предусмотренных доз препаратов.

Существует несколько способов определения антибиотиков в меде. Один из них — метод диффузии в агар. Он базируется на способности антибиотиков диффундировать в агар, засеянный тест-микроорганизмами, и препятствовать их росту. Известен также метод тонкослойной хроматографии, основанный на разделении пробы меда в тонком слое сорбента на хроматографических пластинках. Чтобы оценить содержание остаточных количеств препаратов, на эту же пластинку одновременно с пробой меда наносят стандартные растворы антибиотика с известными концентрациями и сравнивают результаты. Оба метода несовершенны: недостаточно чувствительны, исключают возможность получения количественных результатов, длительны в исполнении и т.д.

За последние годы произошло много изменений в отношениях между Россией и ее ближайшими соседями. В связи с образованием Таможенного союза между Белоруссией, Казахстаном и Россией приняты следующие новые документы: «Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору» и «Единые ветеринарные (ветеринарно-санитарные) требования, предъявляемые к товарам, подлежащим ветеринарному контролю (надзору)». В соответствии с ними в натуральном меде не допускается или ограничивается присутствие ряда лекарственных препаратов, в том числе антибиотиков. При этом речь идет об очень малых количествах препаратов: для левомицетина (хлорамфеникола) отсутствием считается не более 0,3 мкг/кг меда, для антибиотиков тетрациклиновой группы — не более 10 мкг/кг.

Реализация таких жестких требований возможна при утверждении очень точных методов определения указанных веществ. Поэтому в соответствии с планом национальной стандартизации и с целью гармонизации с международными требованиями, предъявляемыми к испытаниям продуктов пчеловодства, и в обеспечение Федерального закона «О техническом регулировании» специалисты ГНУ «НИИ пчеловодства Россельхозакадемии» и ООО «Аналитический центр Апис» разработали национальный стандарт ГОСТ Р 54655–2011 «Мед натуральный. Метод определения антибиотиков».

Метод определения массовых долей антибиотиков тетрациклиновой группы и левомицетина (хлорамфеникола) основан на принципах твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА или ELISA). Пределы обнаружения для тетрациклина, ролитетрациклина составляют 6 мкг/кг, для левомицетина — 0,025 мкг/кг. Диапазон измерений массовых долей антибиотиков, для которых рассчитаны метрологические характеристики, для тетрациклина лежит в пределах 7,5–600 мкг/кг, для левомицетина — 0,075–0,750 мкг/кг.

Суть метода заключается в использовании конкурентного ИФА на планшетах из полистирола. Свободные антибиотики из меда конкурируют с антибиотиками в составе белкового конъюгата, предварительно адсорбированными на твердой фазе (лунке планшета), за ограниченное количество центров связывания антител, специфичных к определенным антибиотикам, во вносимом растворе. После отделения несвязавшихся реагентов количество антител, прореагировавших с иммобилизованным антигеном, для тетрациклинов определяют с помощью вторичных антивидовых антител, меченных пероксидазой хрена, или для левомицетина — без этой стадии. Количество связавшегося с антителами конъюгата определяют с помощью субстрат-хромогенной смеси по изменению цвета раствора в лунке планшета. Количество антибиотика, содержащегося в анализируемой пробе, обратно пропорционально регистрируемой оптической плотности продукта ферментативной реакции.

Стандарт имеет следующие разделы: область применения; нормативные ссылки; термины и определения; требования безопасности; отбор и подготовка проб меда; определение остаточных количеств антибиотиков тетрациклиновой группы; определение остаточных количеств левомицетина (хлорамфеникола). В документе подробно описаны средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы и реактивы для выявления указанных антибиотиков.

Наиболее важный фактор иммуноферментного анализа — качество реагентов. Обычно используют промышленно изготовленные наборы с определенными характеристиками. При разработке указанного метода и расчете его метрологических характеристик применяли наборы «Ридаскрин тетрациклин» и «Ридаскрин хлорамфеникол» производства немецкой компании R-Biopharm, отличающиеся высокой надежностью. Каждый набор сертифицирован и снабжен стандартной градуировочной кривой, что очень полезно для контроля качества измерений.

Современные микропланшетные фотометры подключают к компьютеру, что значительно упрощает измерения и регистрацию результатов. Полученные данные обрабатывают с помощью программного обеспечения RIDASOFT Win (но компьютер при этом можно не использовать). Последовательность расчетов и формулы приведены в соответствующих разделах стандарта.

Окончательный результат при определении массовых долей антибиотиков тетрациклиновой группы выражен в микрограммах на килограмм, левомицетина — в нанограммах на килограмм. Для перевода массовой доли левомицетина в микрограммы на килограмм величину в нанограммах на килограмм делят на тысячу.

Статистический анализ результатов испытаний по оценке точности метода проводили в соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725-6–2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Использование значений точности на практике». Рассчитанные характеристики погрешности и ее составляющие приведены в таблицах этого стандарта.

Применение в лабораториях указанного метода позволит ограничить бесконтрольное использование антибиотиков в пчеловодстве, обеспечит высокое качество меда и, следовательно, повысит его конкурентоспособность.

Т.М.РУСАКОВА, Е.Ю.БАЛАШОВА,
Е.В.АЛЕКСАНДРОВА, Л.А.БУРМИСТРОВА,
В.М.МАРТЫНОВА

«

• 1
• 2
• 3
• 4
• 5

»